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      默瑞生物推出--RPA引物、探針設計服務

      發布時間: 2022-11-25  點擊次數: 203次

        2006年Piepenburg等研發的重組酶聚合酶擴增技術(recombinase polymerase amplification,RPA),該技術可以在37~42 ℃條件下實現待測靶標的快速檢測。它具有反應靈敏度高、特異性強、對儀器依賴程度低且可整合多種檢測模式等優點,特別適用于基層和現場即時檢測。

            RPA反應由3種關鍵酶(重組酶Uvs X、單鏈結合蛋白Gp32以及鏈置換DNA聚合酶)、能量供應體系(三磷酸腺苷、磷酸肌酸以及肌酸激酶)、穩定反應體系(Tris、醋酸鉀、高分子量聚乙二醇以及二硫蘇糖醇等)、三磷酸脫氧核糖核苷酸(deoxyribonucleotide triphosphate,dNTP)、醋酸鎂等成分組成。

      RPA技術反應原理

       

       

       

       

       

         RPA反應基本原理如下圖,主要包含5個階段:

      (1)在三磷酸腺苷供能的條件下,重組酶輔因子(Uvs Y)協助Uvs X與反應體系中的引物結合,形成酶-引物復合體,該復合體在反應體系中尋找雙鏈DNA同源序列[3];


      (2)在同源序列處發生鏈交換反應形成D環結構,同時Gp32與被置換的DNA單鏈結合進一步穩定D環結構;


      (3)Uvs X從酶-引物復合體中解離,DNA聚合酶識別引物游離的3′-OH端,添加dNTPs啟動擴增反應;


      (4)模板母鏈分離,DNA子鏈合成;


      (5)兩DNA子鏈合成完畢。該過程不斷循環實現檢測靶標的指數擴增直到反應體系中能量消耗殆盡。

      圖片1.png

      重組酶聚合酶擴增反應原理圖

      影響RPA擴增的關鍵因素:引物和探針設計

       

       

       

       

       

            目前,仍沒有一款專用的軟件可供用戶設計RPA反應所需的引物和探針。RPA引物、探針設計對RPA反應有重要影響,RPA引物長為30~35個堿基,不同引物、探針組合有不同的擴增效率,為達到實驗預期,進行多次篩選是必要的。探針堿基錯配將影響擴增效率,出現假陽性結果并總結了熒光檢測法探針的要點(熒光基團與淬滅基團之間1~2個堿基,盡可能降低G含量等)。

      默瑞生物推出RPA引物/探針設計服務

       

       

       

       

       

             基于多年來默瑞生物對Twistdx RPA相關產品的市場推廣工作,我們有多年豐富經驗的技術服務團隊。應廣大科研工作者的實際需求,推出以下服務項目。

       

      客戶可根據自己需求填寫提供信息(表1),并選擇如下以下服務方案(表2):

      表1:

      RPA檢測方法

      Basic(普通電泳法)、

       

      exo(熒光定量法)

       

      fpg(熒光定量法)

       

      nfo(試紙條法)

       
       

      檢測靶標信息

      序號

      物種名稱

      基因名稱

      基因信息(NCBI登錄號)

      靶序列信息

               

      表2:

      方案

      靶標

      引物

      探針

      crRNA

      設計周期

      1

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            1周
      2

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          2周
      3

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        3周
      4

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      4周

       

      方案1甲方提供物種名稱,乙方提供該物種的診斷靶標基因名稱、基因信息(NCBI登錄號)、靶標基因序列信息;并出具電子版靶標基因序列信息報告一份;


      方案2甲方提供物種名稱,乙方提供該物種的診斷靶標基因名稱、基因信息(NCBI登錄號)、靶標基因序列信息,同時乙方針對該靶點設計出三對引物供甲方篩選,并出具電子版引物信息報告(含引物特異性分析);   

        

      方案3:甲方提供物種名稱,乙方提供該物種的診斷靶標基因名稱、基因信息(NCBI登錄號)、靶標基因序列信息,同時乙方針對該靶點設計出三對引物和一條探針供甲方篩選,并出具電子版引物信息報告(含引物特異性分析);


      方案4:甲方提供物種名稱,乙方提供該物種的診斷靶標基因名稱、基因信息(NCBI登錄號)、靶標基因序列信息,同時乙方針對該靶點設計出三對引物、一條探針和三條相對應的CRISPR-RNA(crRNA)供甲方篩選,并出具電子版引物信息報告(含引物特異性分析);


      方案5:甲方提供物種名稱,乙方提供全套的RPA或RPA-CRISPR技術服務,包括診斷靶標的基因篩選、引物和探針的設計、特異性和靈敏度實驗驗證、實際樣品檢測及驗證等。

       

      交貨期:自合同生效之日起3個月內。默瑞生物。

      默瑞生物

       

       

       

       

       

      默瑞生物創立以來,已經陸續導入TwistDx,enzymatics,KAPA BIOSYSTEMS,BioDynami,Jackson,Echelon,ChromoTek,Nanocs,Biotechrabbit,Lee Biosolutions, magtivio等優質國際品牌,逐步培育成為專業用戶的選擇。

        產品包含核酸和蛋白兩大產品線。

        (1)核酸產品線提供從樣品破碎儀,核酸質控,核酸電泳,凝膠成像,到質粒純化Kit,快速內切酶,T4 DNA連接酶,PCR Mix等,給您的核酸研究工作帶來方便快捷全新的體驗。

        (2)蛋白產品線提供從樣品處理到蛋白定性,定量,到蛋白Mark,封閉液,PBS,化學發光成像儀,產品做到很好,追求好的客戶體驗,是我們的理念。

        代理儀器產品有:Leica顯微系統,Merck Millipore實驗室純水超純水儀及配套耗材,Roche實時定量PCR儀,Partec流式細胞儀等。

        代理試劑產品有:TwistDx恒溫擴增試劑盒,Echelon脂類研究試劑,KAPA BIOSYSTEMS二代測序試劑, Enzymatics二代測序酶,Jackson ImmunoResearch抗體,ChromoTek熒光蛋白及抗體,Horizon Discovery測序標準品,Biomatik公司Elisa試劑盒,Nanocs PEG修飾劑,Spectrumlabs透析袋,Polysciences微球,JenaBioscience分子試劑,Lifespan Technologies硫酸葡聚糖ELISA試劑盒及抗體,Lee Biosolutions抗體,Emfret心血管研究抗體,Magtivio B.V.DNA提取磁珠,Biontex Laboratories轉染試劑,Canvax™細胞凋亡檢測試劑盒,Matriks Biotek®生物藥物檢測試劑盒,Immunostep流式細胞術抗體,Fuller Laboratories感染性疾病檢測試劑盒,SICGEN抗體,biotechrabbit酶及抗體等。

       

       

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